Q1: 如何处理IP-MS实验中的非特异背景(background)?
常用策略:添加BSA/酵母tRNA阻断剂、严格洗涤(增加次数但不丢特异信号)、设置IgG/mock/珠子-only对照组,低丰度互作还可结合交联(DSP/甲醛)稳定复合物。
Q2: IP-MS可用于血浆/细胞裂解样本?
可以,血液样品(无需去除高丰度蛋白)和细胞系建议用NP-40/Triton温和裂解缓冲液,避免SDS破坏复合物。DIA全扫描对高丰度干扰小,可直接上机,无需分级,数据更真实且平行性好。
Q3: 如何评估IP-MS数据的可信度?
看诱饵富集率、互作CV、背景污染、鉴定率和FDR。高品质数据应满足:特异互作重现性高、背景低、生物学通路一致。