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CHIP-seq测序(Chromatin ImmunoPrecipitation and high-throughput Sequencing)是将染色质免疫共沉淀和高通量测序相结合的技术。通过目的蛋白特异性抗体,将带有特定修饰的蛋白-DNA复合物沉淀下来,从而获取该目标蛋白结合的DNA。通过对DNA进行高通量测序,即可获得该蛋白在染色体上的分布情况。


应用场景

转录因子结合位点鉴定:鉴定转录因子与基因组上的结合位点,揭示转录因子对基因调控的作用;

组蛋白修饰分析:检测不同组蛋白修饰在基因组上的分布,如甲基化、乙酰化等,揭示染色质状态和基因表达的调控;

基因调控网络研究:构建基因调控网络,找出转录因子和其他调控因子与靶基因的相互作用关系;

疾病研究:研究特定蛋白质在疾病发生和发展中的作用,如癌症等;

药物靶点发现:鉴定新的药物靶点,为药物研发提供新的目标。


实验原理

(1)细胞内DNA与蛋白质交联(Crosslink)后,裂解细胞;

(2)通过超声处理将染色质片段化;

(3)抗体与抗原(目标蛋白)特异性识别,进行免疫共沉淀;

(4)纯化DNA,二代建库并测序。

ChIP实验原理图(清晰)

CHIP-seq实验流程图


分析内容

分析分类

分析内容

备注

标准分析

1.测序数据质量评估

Clean Reads占比、碱基质量等


2.比对结果评估

比对率、插入片段大小分布、TSS富集分析


3. Peak鉴定

Peak富集、位置、基因注释;Peak序列的Motif富集等


4.多样品可视化

信号在TSSS附近和Gene body区域的分布等


5.组间位置差异Peak分析

寻找差异Peak、关联基因功能富集、Motif富集等


6.组间信号差异Peak分析

组间差异开放区域检测、关联基因功能富集、Motif富集等

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