Q1:为什么MeRIP-seq需要同时测Input和IP样本?
Input和IP构成一对样品。IP样品用m6A抗体特异性富集甲基化修饰的RNA片段;Input是片段化的RNA对照,用于排除本底表达水平高或非特异性结合的Peaks,提高Peak Calling准确性。
Q2:MeRIP-seq需要单独做RNA-seq吗?
不需要单独做RNA-seq,MeRIP-seq实验中的Input样本即可作为常规全转录组测序数据进行表达定量分析,实现“一份样本,两套数据”。
Q3:RNA降解、完整性RIN值对MeRIP-seq结果影响大吗?
影响较大。若RNA严重降解(RIN<6.0),会导致IP富集效率下降、峰漏检、假阳性升高,建议优先保证RNA完整性。