Q1:宏基因组和16S技术主要有哪些区别,这两种产品应该如何选择?
宏基因组和16S的差异:
1) 研究内容:
宏基因组测序是对环境中所有微生物进行全基因组测序,不仅可以研究群落的物种组成,还能分析每个物种的基因功能和差异等;
16S测序是对细菌的16S保守区域进行测序(真菌测18S或ITS信息),可以根据16S/18S/ITS序列的差异性进行物种分析,或者进行群落物种鉴定。也可以进行物种功能预测,但功能预测在功能差异分析中往往结果较差。
2) 覆盖范围:
宏基因组研究理论上可以检测环境中所有生物的基因组信息(包括原核、病毒、真核生物信息),环境中其他DNA污染会影响测序结果;
16S测序过程首先对目的区域进行扩增,只针对细菌(18S/ITS针对真菌)进行研究,测序过程受其他物种DNA影响较小。
3) 测序策略
宏基因组建库片段大小在300 bp左右,不需要完全测通,目前多采用PE150测序;16S测序策略依据目的片段大小而定,需要对目的片段完全测通,一般选择PE250或PE300测序;目的片段更长的需要选择三代单分子测序。
Q2:如果存在较大的宿主污染,且没有宿主基因组的参考序列,可以进行宏基因组测序吗?
不可以,可用的数据量会很少,会对最后的分析结果造成很大影响。如果在提取的过程,宿主基因组的污染量很少,后期的数据分析还是可用的,但会存在风险。