Q1：mRNA测序一般推荐多大的测序数据量和什么样的读长？
目前主流平台（如Illumina NovaSeq, 华大MGI）通常采用双端150bp(PE150)的测序读长。常规差异表达分析（DEG）：推荐6 Gb数据量/样本。深度分析（可变剪切、低丰度表达基因挖掘、lncRNA分析）：推荐10~15Gb/样本。
Q2：必须要做生物学重复吗？每组推荐几个重复？
必须做。如果没有生物学重复，无法评估组内个体变异，会导致统计学差异分析（P-value）不可靠，目前高分期刊都要求有3个以上的生物学重复。临床人体组织（如肿瘤异质性高）：至少5-10个以上，且尽量收集正常对照组。
Q3：标准的信息分析都会交付哪些内容？
数据质控(QC)：去接头、去低质量reads。
比对(Mapping)：将高质量reads比对到参考基因组。
表达定量：计算每个基因的表达量（通常用FPKM、TPM或Read Counts衡量）。差异表达分析：组间比较，筛选差异基因（DEG），提供火山图、聚类热图。
功能富集分析：对差异基因进行GO注释富集和KEGG通路富集分析。
结构分析（针对有参转录组）：可变剪切分析。
